Получение остеопрогениторного трансплантата in vitro

Получение остеопрогениторного трансплантата in vitro

Цель исследования.

Спроектировать in vitro трёхмерный остеопрогениторный трансплантат.

Материалы и методы.

В качестве носителей различных клеточных линий использовали образцы гидроксиапатита, стеклокерамики, губчатого и кортикального деминерализованного костного матрикса, биоматериала «Остеоматрикс» («Конектбиофарм», Россия). Метод клеточного культивирования применялся для изоляции и масштабирования культур мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) и прогениторных клеток надкостницы (ПКН). Перед посевом клеток на носители осуществляли биоостеоиндукцию ММСК по разработанной и запатентованной нами технологии. Для улучшения визуального наблюдения за расположением клеток на поверхности скафолдов использовали метод мечения плазматических мембран витальными красителями РКН67 Green и РКН26 Red Fluoreccent («Sigma», США). Для детекции щелочной фосфатазы использовали цитохимический метод с использованием субстрата BCIP/NBT Liquid Substrate System («Sigma», США).

Результаты.

При специфических условиях культивирования ММСК индуцировались по остеогенному пути, что было подтверждено положительной окраской на щелочную фосфатазу. Гистологически препарат напоминает костную ткань.

Выводы.

Данная технология позволяет получить 3D-остеопрогениторный трансплантат ex vivo.